菌种的选育及用于煤炭降解转化试验研究.pdf

第3 5 卷第4 期中国矿业大学学报 V 0 1 ．3 5N o ．4 2 0 0 6 年7 月J o u r n a lo fC h i n aU n i v e r s i t yo fM i n i n g8 LT e c h n o l o g yJ u l ．2 0 0 6 文章编号1 0 0 0 1 9 6 4 2 0 0 6 0 4 0 5 0 4 0 6 菌种的选育及用于煤炭降解转化试验研究 王龙贵1 ，张明旭1 ，欧泽深2 ，沈国娟1 1 ．安徽理工大学材料科学与工程系，安徽淮南2 3 2 0 0 1 ；2 ．中国矿业大学化工学院，江苏徐州 2 2 1 0 0 8 摘要通过选育微生物菌种，筛选出S ，，S 。，S ，3 种真菌，应用于煤炭转化降解试验，考察了主要影 响因素 如茵种、煤样粒度、煤种、有无预处理等 对煤降解作用的影响，结果表明，用3 种真茵混合 液体培养对煤炭降解效果最好，i 0d 能降解转化3 8 ．1 3 ％的义马煤炭；煤样粒度越小，降解转化率 越大；变质程度越低和经过预处理的煤越易被微生物降解转化．试验研究中还应用了X R D 和F T I R 对煤微生物转化产物进行了测试分析，结果表明其芳香聚合度和分子量有很大程度的降低，官 能团含量也发生了变化。 关键词木素降解茵；筛选；煤炭生物降解；产物 中图分类号T D9 2 5 1 ；Q9 3 9文献标识码A E x p e r i m e n t a lS t u d yo ft h eC u l t i v a t i o na n dA p p l i c a t i o no f F u n g ’f o rT r a n s f o r m m dB i o d e g r a d a t i o no fCoaUS f o r1r a n s t o r m a t l o na n do a l lD l O d e g r a d a t l o n W A N GL o n g q u i l ，Z H A N GM i n g - x u l ，O UZ e - s h e n 2 ，S H E NG u o - ju a n l 1 ．D e p a r t m e n t a lo fM a t e r i a lS c i e n c e E n g i n e e r i n g ，A n h u iU n i v e r s i t yo fS c i e n c ea n dT e c h n o l o g y ， H u a i n a n ，A n h u i2 3 2 0 0 1 ，C h i n a ；2 ．S c h o o lo fC h e m i c a lE n g i n e e r i n ga n dT e c h n o l o g y ， C h i n aU n i v e r s i t yo fM i n i n g ＆T e c h n o l o g y ，X u z h o u ，J i a n g s u2 21 0 0 8 ，C h i n a A b s t r a c t B ym i c r o o g a n i eF u n g u sc u l t i v a t i o n ，t h r e ek i n d so fe p i p h y t e ，S 1 ，S 4a n dS 7 ，w e r es e l e c t e df o rt h ee x p e r i m e n t so fc o a lb i o d e g r a d a t i o na n dt r a n s f o r m a t i o n ．T h ei n f l u e n c e so fk e yf a c t o r s ，s u c ha sf u n g u st y p e ，s i z ea n dr a n ko fc o a l ，a n dp r e t r e a t m e n t ，o nc o a ld e g r a d a t i o nw e r e s t u d i e d ．R e s u l t ss h o wt h a tt h eb e s td e g r a d a t i o nr e s u l to f3 8 ．1 3 ％w i t h i n1 0d a y si Sa c h i e v e du n - d e rC O c u l t i v a t i o no ft h et h r e ek i n d so fe p i p h y t ef o rY i m al i g n i t e ．T h ef i n e rt h ec o a lp a r t i c l ei s ， t h eh i g h e rt h ep e r c e n t a g eo fd e g r a d a t i o ni s ，t h el o w e rt h ed e g r e eo fm e t a m o r p h i s mo ft h ec o a li s ， t h ee a s i e rt h ec o a li sd e g r a d e db yt h ef u n g u s ，a n dt h ep r e t r e a t e dc o a lg e n e r a l l yt e n d e dt ob em o r e e a s i l yd e g r a d e d ．T h ed e g r a d a t i o np r o d u c t sw e r ea n a l y s e du s i n gX R Da n dF T I R ，a n dt h er e s u l t s s h o wt h a tt h ed e g r e eo ft h ep o l y m e r i g a t i o no ft h ea r o m a t i cn u c l e u sa n dt h em o l e c u l a rw e i g h t so f p r o d u c t sa sw e l la r ed e c r e a s e do b v i o u s l y ，a n dr e m a r k a b l ec h a n g e sa l s ot a k ep l a c ei nt h ec o n t e n t o ff u n c t i o n a lg r o u p sc o m p a r i e dw i t ht h ec o a l ． K e yw o r d s f u n g u so fd e g r a d a t i o nl i g n i n ；f i l t r a t i o n ；c o a l - b i o d e g r a d a t i o n ；p r o d u c t i o n 中国有丰富的煤炭资源特别是褐煤、风化煤等 低阶煤资源，已探明的褐煤保有储量达13 0 3 亿t ， 占全国煤炭储量的1 3 ％弱引．这些低价煤资源直 接燃烧热效率低，工业应用价值低，长期露天堆放， 不仅造成能源的浪费，而且容易造成环境污染．因 此，如何合理开发和充分利用褐煤及低阶煤资 收稿日期2 0 0 5 1 0 1 0 基金项目国家自然科学基金项目 5 0 4 7 4 0 5 6 ；安徽省自然科学基金项目 0 5 0 4 5 0 1 0 2 ；高等学校博士学科点专项科研基金项目 2 0 0 5 0 3 6 1 0 0 1 作者简介王龙贵 1 9 6 3 一 ，男，安徽省枞阳县人，副教授，工学博士，从事矿物加工方面的研究． E - m a i l l g w a n 8 a u s t ．e d u ．c nT e l 0 5 5 4 6 6 6 8 2 0 1 ，1 3 9 6 6 4 6 5 2 4 8 万方数据 第4 期王龙贵等菌种的选育及用于煤炭降解转化试验研究5 0 5 源[ 3 ] ，如何使其转化为高附加值的化工品或液体燃 料，将是一个值得深入研究的课题． 煤炭生物加工包括煤炭微生物脱硫[ 4 巧1 与煤微 生物转化 B i o t r a n s f o r m a t i o n ，用细菌与真菌对煤 炭进行脱硫[ 6 3 很多学者已进行了多年的研究，取得 多项研究成果．而煤微生物转化技术是指煤在微生 物参与下发生大分子的解聚作用，称生物降解 B i o d e g r a d a t i o n 或生物溶解 B i o s o l u b i l i z a t i o n ， 主要是利用真菌、细菌和放线菌等微生物的转化作 用来实现煤的溶解、液化和气化，使之转化成易溶 于水的物质或者烃类气体，从中提取有特殊价值的 化学品及制取清洁燃料、工业添加剂与植物生长促 进剂等．它的用途很广泛，如F a i s o n [ 7 ] 提出被木质 素真菌如黄胞原毛平革菌所溶解的煤物质可望像 聚合木质素那样在工业上用于抗氧剂、表面活性 剂、树脂或粘合剂成分． 1 木素降解菌的选育 自然界中，能降解木质素并产生相应酶类的生 物只占少数．木质素的完全降解是真菌、细菌和微 生物群落共同作用的结果，其中真菌起着主要作 用．真菌借助孢子和菌丝的作用，扩散到木质材料 中，甚至进入细胞内进而分泌特殊的酶攻击木质纤 维的细胞壁，从而降解木质素。本研究拟从腐烂木 材上分离筛选对木质素降解能力较好的真菌来降 解煤炭．试验中所用的P D A 培养基配方见表1 ． 表1P D A 培养基组成 T a b l e1 C o n s t i t u t e so fP D Ac u l t u r em e d i u m 1 ．1降解木素菌一真菌的分离纯化 本试验所用原始菌种是用P D A 培养基从腐 烂的树木中由实验室分离纯化所得．原混合菌种来 自气候潮湿、温暖，适宜环境，在腐败木材上一般长 育该菌．试验时将从山上采集到的含菌腐败木屑用 无菌水浸泡2 4h ，玻璃棒将其搅拌均匀，以此为原 菌液，接种于培养皿中，用P D A 培养基培养。培养 接种前于1 2 1 ℃下灭菌2 0r a i n ，置于3 2 ℃恒温培 养箱中培养． 培养2d 后，培养基上有微小菌落生成．3d 后，菌落迅速扩大，通过观察挑选出能够在平板上 生长并产生变色的菌株，在P D A 培养平板上反复 划线，直至获得纯菌株．试验中获得7 个菌株，编号 为S 。，S ，S 。，S 。，S 。，S 。，S ，，将纯菌株转接至P D A 斜面上，3 2 ℃培养3d 后备用筛选． 使用前，需要先进行扩增，方法是将斜面中的 菌种接种于P D A 培养基的培养皿上，在3 2 ℃恒温 箱中培养，待整个培养皿内铺满真菌后即可使用． 1 ．2 试验用真菌的筛选 年轻煤中保留了很多类木质素结构物质，筛选 降解煤的微生物应在能降解木质紊类物质的微生 物中进行，选择出的菌种对木素降解能力较强，则 其对煤的降解能力相对来说，也较强． 判断一个菌种是否具有降解木素能力可以根 据变色反应 B a v e n d a m m 变色反应 来进行．微生 物若能分泌木素降解酶，就能与培养基中有效的指 示剂发生变色反应，产生特异颜色～变色圈[ 8 曲] ，这 是筛选木素降解菌的有效方法． 木腐类真菌，变色圈的形成有2 种方式．一种 是变色圈在菌丝的外圈形成 d ，／d 。 1 ．试验表明[ 1 ⋯，d 。／d 。 的比值可作为判定该菌是否选择性降解木素依据． 如果比值小于1 ，则选择性降解木质素．若比值大 于1 ，则选择性降解纤维素．一 试验中将前面得到的菌株接种在P D A 一单宁 酸培养基平板的中央．3 2 ℃培养5d ，观察、记录其 颜色变化． 本实验测定了7 个菌株在P D A - 单宁酸培养 基上的变色反应，结果见表2 ． 表2不同菌株在P D A - 单宁酸培养基上的变色反应结果 T a b l e2R e s u l to fb a v e n d a m mo n v a r i a b l eP D Ac u l t u r em e d i u m 菌株 S l S 2 S 3 S 4 S s S 6 S 7 菌丝圈直径d 1 ／c m变色圈直径d 2 ／c md l ／d 2 上述试验中，7 个菌株，有一个菌株的d 。／d 。 1 ，有一个菌株的d 1 ／d 2 接近1 ，S l ，S 4 ，S 5 ，S 6 ，S 7 的比值d ，／d 。都小于1 ，它们都应该能选择性降解 木质素，但是d 。／d 。的大小与木质素的降解率之间 并没有很强的相关性，为了选择高效降解木质素的 菌株，接着又进行了铁氰化钾变色反应 固体培养 基中的木质素被降解后，加入铁氰化钾试剂会在菌 落附近形成微黄绿色，而在培养基的其它部位产生 深蓝绿色、不透明的变色反应 ，结果S 。，S ；和S ，菌 株3 菌株都产生变色反应，因此把S 。，S 。和S ，菌株 确定为煤生物降解试验用菌株． 万方数据 中国矿业大学学报第3 5 卷 I 2 S o 8 百0 ．4 O S lS 2S 3S 4S 5S 6S 7 菌株 图1不同菌株的变色反应d 。／d z 比值比较 F i g ．1d l ／d 2r a t i oc o m p a r i s o nb e t w e e nd i f f e r e n tf u n g u s 2真菌液体培养转化煤试验研究 2 ．1 液体培养不同菌种对煤的转化降解 1 试验用液体培养基．培养基组成见表3 ． 裹3试验用液体培养基 淀的水可溶性组分，保留以备化验用． 4 试验结果与分析．试验重复进行2 次，取其 平均值，数据见表4 ，结果分析见图2 ． 表4 不同菌种液体转化煤能力 T a b l e4 C a p a c i t yo fd i f f e r e n tf u n g u sl i q u i d 转化率／％ 4 ．1 1 3 0 ．4 5 1 7 ．2 6 2 8 ．3 2 3 8 ．1 3 T a b l e 3 L i q u o rc u l t u r em e d i u mu s e di ne x p e r i m e n t s 4 0 成分马铃薯汁蔗糖K H z P 0 4N a H z P 0 4 3 0 B ／ g L 一1 1 0 0 2 0 1 ．00 ．2 N 、- 2 0 M g S 0 4 ‘7 H z O F e S 0 4 ’7 H 2 0C u S 0 4 ‘5 H 2 0 辩1 0 0 ．50 ．1 1 0 30 ．2 1 0 3 0 空白S Is 7S 4混合菌 2 试验用煤样．义马褐煤经硝酸氧化预处理． 图2不同菌瓣嚣熊化降解 用浓度为5m o l ／L 的硝酸浸泡煤样2d ，真空过滤，F i g ．2 C o a ld e g r a d a t i o no fd i f f e r e n tf u n g u s 用去离子水清洗，直至滤液p H 值接近7 为止，烘从表4 和图2 可看出，混合菌种降解转化煤的 干、消毒备用．作用最强，最可能与混合菌种释放的降解酶种类齐 3 试验方法．取4 支已消毒的试管，分别加入全及降解酶数量较多的缘故，微生物释放的酶降解 液体培养基2 0m L ，分别接种混合菌 S 。，s 4 ，S ， ，转化煤这一点与以前研究者结论基本一致[ 1 1 | ． S 。，S 。，S 7 ，3 2 ℃恒温培养2d ．2 ．2液体培养混合菌对不同粒度煤的转化降解 取培养2d 的各菌定量菌液4m L 和定量硝酸2 ．2 ．1试验方法 处理义马褐煤，分别加入2 0m L 液体培养基于试采用同前面试验相同的液体培养基，煤样为硝 管内；另取一支试管，加液体培养基2 0m L 和定量酸处理后的义马褐煤．煤样粒度采用4 个级别6 ～ 一o ．2m m 的煤样，不加菌液，作为空白对照试验．3 ，3 ～0 ．5 ，0 ．5 ～0 ．2 ，d 0 ．2m m ，采用的菌种为混 振荡培养1 0d ，温度3 2 ℃，培养中间测p H 变化．合菌，每试管2 0m L 液体培养基，菌液用量为培养 1 0d 后，过滤、离心，在煤渣中小心挑出菌丝体 不2d 混合菌培养液4m L ，3 2 ℃恒温摇床培养1 5d ， 要挑出煤粒 ，干燥，称重，计算降解转化率．离心的进行固液分离，煤渣烘干、称重，计算转化率． 上清液加N a O H 3m o l ／L 到p H 一1 3 左右，出现2 ．2 ．2试验结果及分析 絮状沉淀．过滤，干燥，得煤微生物转化产物碱可沉试验结果见表5 ，图3 ，4 所示． 表5煤样粒度对微生物降解的影响 T a b l e5I n f l u e n c eo fc o a lg r a n u l a r i t y ∞c o a l - b i o d e g r a d a f i o n 培养作用时间／d 项目 粒度／r a m 空白 O ．2m m O O 5 1 0 1 5 1 5 1 5 0 ．5 0 34 5 ．5 5 ．5 5 ．4 5 ．4 0 ．4 8 33 3 ．9 8 0 ．5 0 08 5 ．5 5 ．5 5 ．4 5 ．4 0 ．4 8 11 3 ．9 3 从表5 ，图3 ，4 可以看出，煤样粒度对微生物 转化降解影响非常大，大于0 ．5m m 的煤样，就难 以降解，菌作用于煤使之降解需要较长时间，而大 于3m m 煤样，就极难降解，在试验的时间里，同空 白试验效果差不多；小于0 ．2m m 煤样，在试验的 1 5d 时间内降解转化率达到4 1 ．3 2 ％，因此进行煤 微生物转化试验时，煤样粒度是一个至关重要的因 素． g g ％ 糊州阻州Ⅲ冽㈣ 万方数据 第4 期 王龙贵等；菌种的选育及用于煤炭降解转化试验研究 5 0 7 一一 6 0 垂薰 馨2 0 1 0 0 粒度／m m 图3煤样粒度对微生物降解转化的影响 F i g ．3 I n f l u e n c eo fc o a lg r a n u l a r i t yo n c o a l b o d e g r a d a t i o n 6 遥4 土 厶 2 O 粒厦／r a m 图4不同粒度煤样被微生物转化 试验培养基p H 值变化 F i g ．4 C h a n g eo fc u l t u r em e d i u mp Ho f c o a lg r a n u l a r i t yt r a n s f o r m e db ym i c r o o r g a n i s m 从培养过程中培养基p H 值变化图即图4 所 示，不同粒级煤，在降解过程中，p H 值变化不一 样，降解率高的其p H 值同时下降也较多， O ．2m m 粒级在1 5d 的培养作用过程中，p H 值 从5 ．5 下降到4 ．1 ，而大粒级煤样同空白试验比 较，基本差不多，p H 值在此过程中，基本变化不 大． 以上说明了混合菌 S 。，S 。，S ，混合 在降解煤 的过程中p H 值发生了变化，培养基p H 值下降得 较多，煤的降解转化率就较高． 2 ．3 液体培养混合菌对不同煤种的转化降解 2 ．3 ．1试验方法 采用同前面试验相同的液体培养基，煤样为硝 酸处理和未处理的义马褐煤，内蒙褐煤、淮南次烟 煤． 取1 2 支已消毒的锥形瓶，分别加入液体培养 基1 0 0m L ，备用．取培养2d 的混合菌定量菌液 2 0m L 和定量的各种煤样，分别加入先前准备好的 锥形瓶中，分为2 组．振荡培养，温度3 2 ℃，7d 后， 取出一组，1 4d 后取出另一组。过滤、离心，在煤渣 中小心挑出菌丝体，干燥，称重． 2 ．3 ．2试验结果与分析 试验重复进行2 次，取其平均值，数据见表6 所示． 从表6 中数据看出，不同的煤样被微生物的降 解程度不同，未经硝酸预处理的煤样，降解转化率 很低，或几乎就难以降解；煤变质程度对微生物的 作用影响很大，次烟煤比褐煤要难降解的多；义马 褐煤比内蒙褐煤相对来说易被微生物作用而发生 降解转化；随培养作用的时间加长，降解率加大． 表6不同煤种的降解转化效果 T a b l e6 E f f e c to fd e g r a d a t i o no fd i f f e r e n tc o a lt y p e s 培养时间／dy I T I s n m Sh n s y m n n lh n 1 i 了i i 丽辐j i 甬酸浸泡预处理；y m 为义马原褐煤i n m s 为 内蒙褐煤硝酸浸泡预处理；n m 为内蒙原褐煤I h n s 为淮南次 烟煤硝酸浸泡预处理；h n 为淮南次烟煤 3降解转化产物的X R D 和F r I R 研究 3 ．1试样及仪器 试验样品为1 8 为义马褐煤微生物转化的水 溶物碱沉淀物；2 8 为义马褐煤微生物转化作用后 的残渣；3 * 为义马原褐煤经硝酸处理产物． 试验仪器有日本理学 R i g a k u 公司生产的 D ／M a x - 3 B 型x 射线衍射仪和德国B R U K E R 公 司制造V E C T O R 3 3 型红外光谱仪 F T I R ． 3 ．2X R D 和F T I R 测试结果及分析 X R D 测试结果见图5 所示，F T I R 测试结果见 图6 所示． i 蠢 囊 2 器 O 衍射角， 。 图5义马褐煤及微生物转化物的X 射线衍射分析图谱 F i g ．5 X - r a yd i f f r a c t i o na n a l y s i ss p e c t r u mo fl i g n i t e a n dm i c r o o r g a n i s mb i o - t r a n s f o r m a t i o n 根据图6 a 义马褐煤及微生物转化物的X 射 线衍射分析图谱，可作出几种样品层片直径L 。，微 晶层片平均堆砌高度L 。及层片间距do o z 之间的关 系曲线，见图7 所示．可以看出义马煤降解后水溶 物微晶的L 。，L 。，都有相当程度的减小与降低， d 呲增大了，其间的层片数减少．说明煤微生物转 化的水溶性产物的芳香环单层的芳环缩聚程度有 所降低，也即煤微生物转化降解后的水溶性产物芳 香单层层片的芳环数减少，芳香层片的堆砌高度降 低，芳香结合程度降低，大分子结构被降解了． 黜黜量。枷伽抛。啪枷枷瑚 万方数据 中国矿业大学学报第3 5 卷 述 静 韶 蝴 | | 要陋骥 ，乳b 意丽赢赢函蒜 喜 螽 苷 蛔 1 ◆ 波劐t ／e m o f b 2 4 样品 波数k m ．‘ 渡散／c m “ ‘ c 3 9 样品 d l 匕3 8 样品 图6不同样品红外光谱 F i g ．6 I n f r a r e ds p e c t r u mo fd i f f e r e n ts a m p l e s 根据义马褐煤样被微生物转化作用前后的之，而在图6 a 中峰形最弱，从对照谱图 图6 d 中 F T I R 谱图及对照谱图 图6 可见，其峰形整体走也可清楚的看出．这说明，义马褐煤样中的芳香类 势差不多，相差较大的地方在波数33 0 0 和16 0 0 ， 高聚物被大量的降解成低分子量类物质及其它类 15 0 0c m “附近，它们分别为芳烃的一C H 与芳环 物质，从图6 b 中显示出酚羟类、羟基类、羰基类物 的骨架振动．在图6 c 中峰形最强，图6 b 中峰形次质有所增加． 1 ．2 2 口I2 0 毒I ．1 8 0I ．1 6 搿I ．1 4 ⅫI ．1 2 盏瑚．1 0 1 ．0 6 g 喜 型 盍 样品样品 a 层片直径La 变化 b 馓晶层片平均堆砌高度变化 图7L 。，L 。及d 。． 之m l 】的荚系 F i g ．7R e l a t i o n s h i pa m o n g ，。，，。a n d 以Ⅲ2 4 结论 1 通过选育筛选出较高降解木质素的真菌 S 1 ，S S 7 ． 2 3 种真菌的混合液体培养对煤的转化降解 作用比单个菌种要强得多，降解转化1 0d 要高出 8 ％以上． 3 煤样粒度对微生物降解煤的作用影响很 大，煤样粒度越小，越易被微生物攻击．小于 0 ．2m m 煤样被菌作用1 5d 比0 ．5 ～o ．2m m 煤样 降解转化率要高出1 5 ％左右． 4 煤变质程度对微生物的降解作用影响习E 常 大，变质程度越低，越易被微生物攻击降解；有无预 处理氧化煤样，对微生物降解煤也有很大的影响， 经硝酸预处理后的煤样，较易被微生物作用而发生 降解转化．酸处理义马褐煤被菌作用1 4d 比其它 种类煤降解转化率要高1 0 ％以上． 5 通过对煤微生物降解转化产物的X R D ， F T I R 测试研究，煤微生物转化后的水溶性物质也 是一种复杂的混合物，其芳香聚合度、分子量有很 大程度的降低，官能团含量发生了变化，其中酚羟 类、羟基类、羰基类物质有所增加． 参考文献 [ 1 ] 戴和武，谢可玉．褐煤利用技术[ M ] ．北京煤炭工业 出版社，1 9 9 9 ． [ 2 ]吕海亮，陈皓侃。李文，等．矿物质对义马煤中A s 在热解过程中挥发性的影响[ J ] ．中国矿业大学学报。 2 0 0 4 。3 3 3 3 1 8 3 2 1 ． L VH a i l i a n g ，C H E NH a o k a n ，L IW e n ，e ta 1 ． 万方数据 第4 期王龙贵等菌种的选育及用于煤炭降解转化试验研究5 0 9 E f f e c to fm i n e r a lm a t t e r so nv o l a t i l i t yo fA Sd u r i n g p y r o l y s i so f c o a lf r o mY i m a [ J ] ．J o u r n a lo fC h i n a U n v i e r s i t yo fM i n i n g T e c h n o l o g y ，2 0 0 4 ，3 3 3 3 1 8 3 2 1 ． [ 3 ] 郑平．煤炭腐植酸的生产和应用[ M ] ．北京化学 工业出版社，1 9 9 1 ． [ 4 ] 周长春，刘炯天，张兴，等．微生物一浮选脱硫的影 响因素研究I - j ] ．中国矿业大学学报，2 0 0 3 ，2 9 6 7 1 0 7 1 2 ． Z H O UC h a n g c h u n ，L I UJ i o n g - t i a n ，Z H A N GX i n g ， e ta 1 ．E f f e c t so fm i c r o b i a l f l o a t a t i o nd e s u l f u e r i z a t i o n [ J ] ．J o u r n a lo fC h i n aU n i v e r s i t yo fM i n i n g T e c h n o l o g y ，2 0 0 3 ，2 9 6 7 1 0 7 1 2 ． [ 5 ] 张兴，肖雷，王永志．3 种细菌对煤中黄铁抑制作 用的研究[ J ] ．中国矿业大学学报，2 0 0 1 ，3 0 6 6 0 4 6 0 7 ． Z H A N GX i n g ，X I A oL e i ，W A N ；Y o n g z h i ．S u p p r e s s i o ne f f e c t so ft h r e eb a c t e r i ao np y r i t ei nc o a ld u r i n gf l o t a t i o np r o c e s s [ J ] ．J o u r n a lo fC h i n aU n i v e r s i t y o fM i n i n g T e c h n o l o g y ，2 0 0 3 ，3 0 6 6 0 4 6 0 7 ． [ 6 ] 徐复铭，杨凌霄，周申范，等．用白腐菌脱除重庆高硫 煤中硫的研究[ J ] ．煤炭学报，1 9 9 9 ，2 4 4 4 2 4 4 2 8 ． X UF u - m i n g 。Y A N GI 。i n g x i a o 。Z H O US h e n - f a n ， e ta 1 ．S t u d yo nc o a ld e s u l f u r i z a t i o nb yw h i t er o tf u n g u s [ J ] ．J o u r n a lo fC h i n aC o a lS o c i e t y ，1 9 9 9 ，2 4 4 4 2 4 4 2 8 。 [ 7 ] F A I S O NBD ．B i o l o g i c a lc o a lc o n v e r s i o n s [ J ] ．C r i t i c a l R e v i e w si nB i o t e e h n o l o g y ，1 9 9 1 ，1 1 4 3 4 7 3 6 6 ． [ 8 3 浦跃武，甄浩铭，冯书庭，等．白腐菌产锰过氧化物酶 条件的研究口] ．菌物系统，1 9 9 8 ，1 7 3 2 5 1 2 5 5 ． P UY u e w u ，Z H E NH a o - m i n g ，F E N GS h u - t i n g 。e t a 1 ．S t u d yo nt h ec o n d i t i o no fp r o d u c t i o nM n - P r e o x i - d a s e M n P b yp h a n e r o c h a e t ec h r y s o s p o r i u mm i g [ J ] ．F u n g u sS y s t e m ，1 9 9 8 ，1 7 3 2 5 1 2 5 5 ． [ 9 ]中野隼三．木质素化学一基础与应用[ M ] ．高洁，译． 北京轻工业出版社，1 9 8 8 4 2 0 ． [ 1 0 ] M E R C I E RRR ，M O U G I NJC ，S I G O I L L O TJc ， e ta 1 ．W e ts a n dc u l t u r e st os c r e e nf i l a m e n t o u sf u n g i f o rt h eb i o t r a n s f o r m a t i o no fp o l y c c l i ca r o m a t i ch y d r o c a r b o n s [ J ] ．B i o t e e h n o l o g yT e c h n o l o g y 。1 9 9 8 ，1 2 1 0 7 2 5 7 2 8 [ 11 ] F A K O U S S ARM ．T h ei n f l u e n c eo fd i f f e r e n tc h e l a t o r so nt h es o l u b i l i z a t i o n ／l i q u e f a c t i o no fd i f f e r e n t p r e t r e a t e da n dm a t u r a tl i g n i t e s [ J ] ．F u e lP r o c e s s T e c h n o l ，1 9 9 4 ，4 0 2 1 8 2 1 9 2 ． 责任编辑骆振福 万方数据