营养因子对黄单胞菌降解聚乙烯醇的影响.pdf

第3 6 卷第6 期 中国矿业大学学报 V 0 1 ．3 6N o ．6 2 0 0 7 年1 1 月J o u r n a lo fC h i n aU n i v e r s i t yo fM i n i n g ＆T e c h n o l o g y N o v ．2 0 0 7 文章编号1 0 0 0 1 9 6 4 2 0 0 7 0 6 0 8 5 3 0 5 营养因子对黄单胞菌降解聚乙烯醇的影响 张兴“2 ，堵国成1 ，陈坚1 1 ．江南大学工业生物技术教育部重点实验室，江苏无锡2 1 4 0 3 6 2 ．中国矿业大学化工学院，江苏徐州 2 2 1 1 1 6 摘要基于前期研究分离到的一株能完全降解聚乙烯醇 P V A 的黄单胞茵 X a n t h o m o n a s8 p ， 考察了部分简单有机碳源、水溶性维生素、氨基酸对谊菌株细胞生长和降解P V A 的影响．结果 表明，对所考察的3 种共代谢基质，0 ．6g ／L 葡萄糖在台2 ．0g ／L 蛋白胨F 4 0 3 条件下，可使1 ．0 g ／LP V A 完全降解时间缩短至约4 0h ．0 ．4 m g ／L 泛酸钙对细胞生长影响较小，但可促进细胞黄 色素的形成，而黄色素含量高的静息细胞对P V A 降解量有所增加．2 0 ．0m g ／L 甲硫氨酸、半胱 氨酸可促进细胞明显生长，进而提高P V A 降解率． 关键词聚乙烯醇；黄单胞茵属；生物降解；营养成分；静息细胞 中图分类号Q9 3 9 ．9 文献标识码A E f f e c to fN u t r i e n t so nP o l y V i n y l A l e o h o lD e g r a d a t i o n b yaS t r a i no fX a n t h o m o n a ss p Z H A N GX i n 9 1 ”，D UG u o - c h e n 9 1 ，C H E NJ i a n l 1 ．K e yL a b o r a t o r yo fI n d u s t r i a lB i o t e c h a o l o g y ，M i n i s t r yo fE d u c a t i o n ，S o u t h e r nY a n g t z eU n i v e r s i t y W u x i ，J i a n g s u2 1 4 0 3 6 ，C h i n a , 2 ．S c h o o lo fC h e m i c a lE n g i n e e r i n ga n dT e c h n o l o g y ， C h i n aU n i v e r s i t yo fM i n i n g ＆T e c h n o l o g y ，X u z h o u ，J i a n g s u2 2 1 1 1 6 ．C h i n a A b s t r a c t B a s e do nas t r a i no fi s o l a t e dX a n t h o m o n a ss pw h i c hc o u l dd e g r a d ec o m p l e t e l yP o l y v i n y l a l c o h o l P V A ，t h ee f f e c t so fs o m em e d i u mc o m p o n e n t so nc e l lg r o w t ha n dP V Ad e g r a d a t i o nw e r ei n v e s t i g a t e d ，w h i c hi n c l u d e ds e v e r a ls i m p l ec a r b o ns o u r c e s ，，a q u e o u sv i t a m i n s a n da m i n oa c i d s ．T h er e s u l t ss h o wt h a tg l u c o s ei sb e n e f i c i a lf o rP V Ad e g r a d a t i o na m o n g3 k i n d so fc o - m e t a b o l i s ms u b s t r a t e si nt h em e d i u mw i t h2 ．0g ／Lp e p t o n eF 4 0 3 ．T h ec u l t u r et i m e f o rc o m p l e t ed e g r a d a t i o no fP V Ao f1 ．0g ／Lw a ss h o r t e n e dt oa b o u t4 0h o u r sw h e nt h ec o n c e n t r a t i o no fg l u c o s ew a s0 ．6g ／L ．B yt h ea d d i t i o no fc a l c i u mp a n t o t h e n a t eo f0 ．4m g ／L ，t h e g r o w t ho fb a c t e r i aw a sl i t t l ei n f l u e n c e d ，b u tt h ep r o d u c t i o no fx a n t h o m o n a d i ni nc e i l sw a ss t i m u l a t e d ．T h ed e g r a d a t i o nr a t eo fP V Aw a se n h a n c e df o rr e s t i n gc e l l sw i t hm o r ex a n t h o m o n a d i n ． B ya d d i n gm e t h i o n i n eo rc y s t e i n eo f2 0 ．0m g ／L ．t h eg r o w t ho fc e i l sa n dP V Ad e g r a d a t i o nr a t e w e r et n c r e a s e Q ． K e yw o r d s p o l y v i n y l a l c o h o l P V A ；x a n t h o m o n a s ；b i o d e g r a d a t l 。n ；n u t r i e n t s tr e s t i n gc e l l s 聚乙烯醇 P V A 是一种具有诸多优良性质的 水溶性高分子聚合物，在建筑、纺织、造纸等行业有 着广泛的应用，如不进行处理则会大量进入环境， 造成污染[ ⋯．但是由于P V A 在自然环境中较难 收稿日期2 0 0 7 一0 4 15 基金项目国家高技术研究发展计划 8 6 3 项目 2 0 0 3 A A 3 2 2 0 5 0 作者简介张若 1 9 6 4 一 ，男，山东省莱阳市』、，酬教授，工学博士，从事环境生物技术方面的研究． E - m a i l k u a n g d a z h a n g 1 6 3 ．0 0 1 1 1 T e l 0 5 1 6 8 3 5 9 1 0 5 9 万方数据 中国矿业大学学报第3 6 卷 降解，因此筛选高效的P V A 降解菌一直受到较多 的关注‘“3 ． 在前期的研究过程中，作者从腐败的P V A 胶 水中分离到一株能高效独立降解并矿化P V A 的 黄单胞菌 X a n t h o m o n a ss p ． [ 7 ] ．研究发现，该菌 株降解P V A 的营养需求较为复杂。不同种类复杂 有机氮对该菌株降解P V A 产生的影响不同，其中 蛋白胨和牛肉膏可促进该菌株生长并提高P V A 的降解速率；但在酵母浸膏存在条件下该菌株降解 P V A 速率非常缓慢；由此说明可能存在某些有利 于该菌株生长或降解P V A 的关键营养成分． 由于蛋白胨、牛肉膏中含有较为多样的氨基 酸、维生素和碳源等，因此本文主要考察了一些简 单有机碳、水溶性维生素和氨基酸，探讨了其影响 过程，旨在为寻求促进P V A 生物降解的因素以及 阐明P V A 生物降解机制提供参考． 1实验 11 实验材料 菌种为一株黄单胞菌 X a n t h o m o n a ss p ．X a - 5 ，筛选自腐败的P V A 胶水[ 7 ] ．种子培养基成分 为0 ．2gM g S O l 7 H 2 0 ，0 ．1gN a C l ，3 ．0g 蛋白 胨F 4 0 3 ，1 0 0 0m L 蒸馏水，p H 一7 ．5 ．基本培养基 成分为1 ．0g N H 。 z S O ‘，0 ．5gK H 2 P O 。 3 H 2 0 ，0 ．5g K 2 H P n ，0 ．2g M g S 0 4 7 H 。O ，0 ．1 g N a C I ，0 ．0 1gF e S 0 4 7 H z O ，1 0p L 微量元素 液，1 0 0 0m L 蒸馏水，p H 7 ．5 ．静息细胞培养基成 分为LO gP V A l 7 5 0 ，0 ．5gK H 2 P O ‘3 H 2 0 ，0 ．5 gK 2 H P O 一02gM g S 0 4 7 H 2 0 ，1 0 0 0m L 蒸馏 水，p H 7 ．5 ．以上培养基均在1 0 5 k P a 压力下灭菌 2 0r a i n ．其它材料按实验要求添加． 要考察的简单碳源主要包括葡萄糖、乙酸钠、 丙三醇，购于上海化学试剂公司．要考察的水溶性 维生素，其基本浓度参考文献[ 8 ] ，主要包括泛酸 钙、肌醇、烟酸、盐酸吡哆辛、盐酸硫胺、核黄素、D 一生物素、维生素B 1 ，对氨基苯甲酸；要考察的氨 基酸，其基本浓度参考文献E 3 ] ，主要包括丙氨酸、 精氨酸、天冬氨酸、半胱氨酸、胱氨酸、谷氨酸、谷氨 酰胺、甘氨酸、组氨酸、舁亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、 甲硫氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、色氨 酸、酪氨酸、缬氨酸；购于上海生工生物工程技术服 务有限公司．P V A l 7 5 0 聚合度1 7 5 0 士5 0 、蛋白胨 F 4 0 3 购于上海化学试剂公司． 1 ．2 培养方法 种子培养过程是取斜面菌种1 支，接人装有 5 0m L 种子培养基的2 5 0m L 三角瓶中，摇瓶转速 1 8 0r ／m i n ，3 0 ℃，培养4 8h 左右． 摇瓶培养过程是将培养好的种子60 0 0r ／r a i n 离心1 5r a i n ，用无菌生理盐水洗涤3 次，再配制成 原浓度，然后接人装有1 0 0m L 基本培养基的5 0 0 m L 三角瓶中，接种量按2 ％ 体积分数 计，其余条 件同种子培养． 静息细胞的制备参考文献[ 7 ] ，摇瓶转速 7 0r ／r a i n ，其余培养条件同摇瓶培养． 1 3分析方法 茵体干重的测定是将三角瓶中培养液60 0 0 r ／m i n 离心1 5r a i n ，用去离子水洗涤菌体沉淀物3 次并离心，在8 0 ℃烘箱中烘至恒重，分析天平称 重． 菌量测定参考文献E T ] ，采用比浊法测定． P V A 测定参考文献[ 9 ] ，采用碘一硼酸试剂法 并经改良 除特殊情况外，一般按照以下方法 ，测 定时用2 5m L 容量瓶，样品经沸水浴处理1 0m i n ， 60 0 0r ／m i n 离心1 5r a i n ，然后稀释到一定浓度，统 一取5m L ，加0 ．0 0 3m o l ／L 碘试剂0 ．2m L ，0 ．6 4 m o l ／L 硼酸溶液5m L ，采用分光光度计，1c n l 光 程6 9 0n m 测定吸光度，与标准曲线进行换算，再 乘以稀释度得出残留P V A 浓度，计算P V A 降解 率． 黄色素的提取和吸收光谱测定参考文献D o ] ， 并进行调整，培养结束后，准确量取2 0m L 菌渡人 离心管，80 0 0r ／r a i n 离心保留菌体沉淀，按2 0 0 m L 甲醇；1g 莆体干重向菌体沉淀加入甲醇，沸 水浴中处理5r a i n ，冷却后80 0 0r ／r a i n 离心，取上 清液，再用少量新鲜甲醇洗涤菌体沉淀并同法离 心，重复3 次，上清液合并，然后用新鲜甲醇调整最 终体积为1 0m L ．上清液即为黄色素粗提物，在 U V - 2 6 0 2 A 紫外可见分光光度计上扫描测定3 8 0 ～5 0 0n m 的吸收峰． 葡萄糖测定参考文献[ 1 1 ] ，采用D N S 法． 2 结果与讨论 21 外加碳源种类的影响 已有的研究发现微生物以共代谢方式可以降 解某些难生物降解物质“““，但对P V A 降解菌的 共代谢研究尚未见报道．本文前期研究中，筛选了 一些对菌体生长有促进作用的单糖、有机酸、醇等 碳源，结果发现能明显促进菌体干重增加的碳源依 次为葡萄糖、乙酸钠、丙三醇．因此在含2 ．0g ／L 蛋 白胨F 4 0 3 ，1 ．0g ／LP V A 基本培养基上，考察了这 万方数据 第6 期 张兴等营养因子对黄单胞菌降解聚乙烯醇的影响 3 种碳源对P V A 降解的影响，结果见图1 S 害 ■ 智 主 岳 辅 撒 蜜 Io o8 0 6 0 4 o2 0 时间m 圉1 不同有机碳源的影响 F i g ．1 P V Ad e g r a d a t i o nw i t hd i f f e r e n to r g a n i cc a r b o n s o nar o t a r ys h a k e r 由图l 可见，在与P V A 共存条件下，葡萄糖、 乙酸钠、丙三醇 质量浓度均为0 ．2g ／L 的影响各 不相同，首先，葡萄糖组P V A 降解较快，培养至约 4 8hP V A 即完全降解，丙三醇组P V A 在约7 2h 完全降解，而己酸钠组P V A 降解较为缓慢；比较3 种碳源可见，葡萄糖最有利于P V A 的生物降解， 可作为该菌株较为理想的一级基质，而乙酸钠对 P v A 降解反而产生抑制作用． 图2 考察了不同葡萄糖添加量对P V A 降解 产生的影响． 錾i 赫萄覆7l 蓥溆 图2 中可见，随添加葡萄糖浓度不同，葡萄糖 消耗时问不同 A ，葡萄糖浓度增加，其完全消耗 时间延后．P V A 降解时问也发生变化 B ，其中添 加0 ．6g ／L 葡萄糖组，P V A 在培养至约4 0h 即降 解完全；添加0 ．2g ／L 和0 ．4g ／L 葡萄糖组的 P V A 残留曲线较为相近，P V A 在培养至4 8h 左 右降解完全；而添加0 ．8g ／L 和1 ．0g ／L 葡萄糖组 中的P V A 降解速率减小．此外，比较A 和B ，各浓 度组的葡萄糖完全消耗时间均提前于P V A 完全 降解时间，表明该菌株对葡萄糖利用效率高于对 P V A 降解效率．从实验结果看，尽管葡萄糖可作为 一级基质，但葡萄糖添加量应保持在一定范围，在 含1 ．0g ／L P V A 的培养基中，添加0 ．6g ／L 葡萄糖 有利于缩短P V A 降解时间． 2 ．2水溶性维生素的影响 在对水溶性维生素初步研究中，为避免蛋白 胨、酵母膏等有机氮中维生素的干扰，曾采用含 0 ．4g ／L 混合氨基酸 各种氨基酸浓度比为1 1 ， 以1 ．og ／L 葡萄糖为碳源的基本培养基，考察了混 合水溶性维生素 各0 ．4m g ／L 对细胞生长的影 响，同时以1 ．0g ／LP V A 替代葡萄糖，考察了水溶 性维生素对P V A 降解的影响．研究结果发现，添 加混台水溶性维生素组与未添加组的菌体干重经 F 方差检验 a 0 ．0 1 组间差异不显著，表明混合 水溶性维生素对细胞生长影响不明显} 同时在 P v A 降解实验中两组P V A 降解率也未有显著差 异，说明混合水溶性维生素对促进P V A 生物降解 也不明显．但实验发现添加混合水溶性维生素培养 的菌液颜色耍略黄于未添加组． 由于对影响菌液颜色变化的具体维生素尚不 清楚，因此采用测定等量细胞黄色素吸收光谱的方 法，进行了维生素逐一筛选实验，结果发现只有添 加泛酸钙培养的菌体等量细胞黄色素吸收峰高于 其它组．为进一步确定实验结果，采用单一添加泛 酸钙与除泛酸钙以外的其它维生素混台液培养菌 体，测定的等量细胞黄色素吸收光谱见图3 ．由图 可见，单一泛酸钙组黄色素吸收峰左右肩均更明显 且吸光度较高；而其它水溶性维生素混合液培养组 吸光度偏低，表明外源添加泛酸钙有助于该菌株细 胞黄色素合成的增强，其它水溶性维生素则不产生 作用． 02 8 02 4 m 2 0 0 1 6 0 1 2 0 0 8 0 0 4 3 8 04 0 04 2 04 4 0 4 6 04 8 0 5 0 0 坎埘m 图3 在添加水溶性维生索条件下 细胞合成黄色素的吸收峰 F i g ．3A b s o r p t i o ns p e c t r ao fx a n t h o m o n a d i nw i t h d l f i e r e n tk i n d so fw a t e r _ s o l u b l ev i t a m i n s 为了进一步考察黄色素含量不同的菌体对 P V A 降解是否产生影响，采用单一添加泛酸钙、其 它水溶性维生素混合培养液制备的静息细胞进行 研究．在添加0 ．6g ／L 叠氮化钠条件下，考察了 1 ．0g ／L D C W 静息细胞对P V A 的降解，结果见 万方数据 8 5 6中国矿业大学学报第3 6 卷 图4 ．首先，除1 2 1 ℃处理2 0r a i n 实验组外，其余二 组曲线变化较为相似．1 6h 后．单一泛酸钙、其它 混合维生素培养的静息细胞对P V A 降解量基本 不再变化；培养结束后其它混合维生素培养的静息 细胞对P V A 降解量低于泛酸钙培养组．由于在添 加0 ．6g ／L 叠氮化钠条件下，静息细胞已失去氧化 代谢活性[ “，且离心沉淀细胞经碘试剂测试呈 P V A 特有的蓝色，推测已降解的P V A 实际上可能 主要吸附在静息细胞表面．黄色素是黄单胞菌属菌 体细胞表面的呈色物质，其化学组成主要是类异戊 二烯衍生物；比较图3 和图4 ，黄色素含量高的菌 体，其静息细胞对P V A 降解量也大，推测黄色素 与菌体吸附P V A 可能有某种关联， ，1 4 0 毫1 2 0 量1 器 礁6 0 4 。0 山 0 时l 圃，l 图4 添加水溶性维生素培养静息细胞对P V A 的降解 F i g ．4 P V Ad e g r a d a t i o nb yr e s t i n gc e l l sc u l t u r e dw i t h d i f f e r e n tk i n d so fw a t e r - s o l u b l ev i t a m i n s 2 ．3 不同氨基酸的影响 前期研究发现，该菌株在仅含无机氮条件下不 能生长，因此采用含0 ．4m g ／L 泛酸钙、1 ．0g ／L 葡 萄糖基本培养基，考察了在不害或含1 ．0g ／L P V A 条件下，添加单一氨基酸 添加量2 0m g ／L 或混合氨基酸 添加量各为2 0m g ／L 对细胞生长 和P v A 降解的影响 见图5 ．实验组号1 为无氨 基酸；2 为缺甲硫氨酸／半胱氨酸混合氨基酸；3 为半胱氨酸；4 为甲硫氨酸；5 为缺甲硫氨酸混合 氨基酸；6 为缺半胱氨酸混合氨基酸；7 为混合氨 基酸；8 为无氨基酸 P V A ；9 为缺甲硫氨酸／半 胱氨酸混合氨基酸 P V A ；1 0 为半胱氨酸 P v A ；1 1 为甲硫氨酸 P V A ；1 2 为缺甲硫氨酸混 合氨基酸 P V A ；1 3 为缺半胱氨酸混合氨基酸 P V A ；1 4 为混合氨摹酸 P V A ． 撼 骥 o 。％ 4 0 3 0 蠢 2 0 萋 ．。≤ 0 实验组号 图5 氨基酸对菌体生长与降解的影响 F i g ．5 G r n w t ho fc e l l sa n dd e gr a d a t i o no fP V A w i t hd i f f e r e n tk i n d so fe a s a r n i n oa c i d s 从I 冬j5 可见，在不含P V A 条件下，氨基酸对 菌体生长产生不同的影响．培养结束后。添加缺甲 硫氨酸／半胱氨酸混合氨基酸组与无氨基酸组相 比，其菌体干重差异不显著；添加单一半胱氨酸或 甲硫氨酸组菌体干重均明显高于无氨基酸组，尤其 是在混合氨基酸中分别含有半胱氨酸或甲硫氨酸 组以及全部含有这两种氨基酸实验组，其菌体干重 分别增加到0 ．2 4 7 ，0 ．2 6 4 和0 ．2 9 5g ／L ，表明甲硫 氨酸、半胱氨酸对于细胞生妊具有明显促进作用． 在古P V A 条件下，菌体生长状况与不含P V A 条 件较为相近，且含有甲硫氨酸、半胱氨酸各实验组 与不含这2 种氨基酸实验组相比，其P V A 降解率 显著提高．结果表明，添加甲硫氮酸、半胱氨酸能促 进细胞物质合成，也能提高P V A 降解率．虽然在 含P V A 条件下添加甲硫氨酸、半胱氨酸组P V A 降解率高于缺少这两种氨基酸组，表明甲硫氨酸、 半胱氨酸有利于提高P V A 降解率，但是在不含 P V A 条件下添加甲硫氨酸、半胱氩酸组的菌体于 重也高于缺少这两种氨基酸组，而且前述发现细胞 表面口发附有P v A ．因此，推测导致P V A 降解率的 提高可能是由于菌量增加而造成菌体表面吸附 P v A 量加大；或者甲硫氨酸、半胱氨酸确实有助于 菌体氧化P V A ，导致P V A 降解率的提高，但后者 尚不能确定． 表1 氨基酸对静息细胞降解P V A 的影响C 降解率 T a b l e1E f f e c to fa m i n oa c i d so nP V Ad e g r a d a t i o n b yr e s t i n gc e l l s d e g r a d a t i o nr a t e 为排除生长因素的干扰，在静息细胞培养基中 添加甲硫氨酸、半胱氨酸、其它氢基酸，以考察不同 氨基酸对静息细胞降解P V A 的影响．从表l 可 见，在9 6h 静息细胞培养过程中，未添加氨基酸组 P V A 降解率较低 2 ．4 1 ％ ，而添加甲硫氨酸、半胱 氨酸组静息细胞对P V A 降解率分别提高到 1 5 ．3 3 ％和1 2 ．1 4 ％，且随添加量增加，P V A 降解 率略有提高；添加其它氨基酸组 表中以谷氨酸为 代表 P V A 降解率的提高不明显．由此可见，甲硫 氨酸和半胱氨酸有助于细胞代谢，从而提高P V A 降解率．巧合的是，甲硫氨酸和半胱氨酸都属于脂 肪族含硫氨基酸，因此这两种氨基酸对细胞降解 P V A 究竟产生怎样的影响值得深入研究． 目倒翻翻啊翻翻倒翻喇肚自如啊影翻髟暖群影E他日0翻翻喇Hi目目嘲尉唰翻喇Hmn ， 每 皿0直解l______一|二f降-_____I然●山⋯ - 日 万方数据 第6 期张兴等营养因子对黄单胞菌降解聚乙烯醇的影响8 5 7 3结论 1 该菌株容易利用的简单有机碳源依次为葡 萄糖、乙酸钠、丙三醇，但在降解P V A 过程中只有 葡萄糖、丙三醇能加快P V A 降解；在2 ．0g ／L 蛋白 胨条件下，添加0 ．6g ／L 葡萄糖能有效缩短P V A 降解时间． 2 考察的水溶性维生素对菌体生长和P V A 降解不产生明显影响，但外源添加泛酸钙能促进菌 体细胞黄色素合成．由于黄色素含量高的等量细胞 对P v A 吸附去除量也大．推测黄色索与P V A 吸 附去除可能有某种关联． 3 甲硫氨酸、半胱氨酸对细胞生长具有较明 显的促进作用，说明这两种氨基酸是细胞生长的必 需生长因子；此外，静息细胞实验表明，甲硫氨酸、 半胱氨酸对促进细胞代谢从而促进降解P V A 也 产生较大影响． 参考文献 [ 1 3C H I E L L I N lE ．C O R T IA ．A N T O N Es 。e ta 1 ．B i o d e g r a d a t i o no fp o l y v i n y la l c o h 0 1 b a s e dm a t e r i a l s F J ] ．P r o gP o l y mS O l ，2 0 0 3 ，2 8 9 6 3 1 0 1 4 ． [ 2 ] Y U T A K AT ，G O R OK ，A M N A TJ ．Am o d i f i e d m e t h o df o ri s o l a t i n gp o l y v i n y la l c o h 0 1 d e g r a d i n 客 b a c t e r i aa n ds t u d yo ft h e i rd e g r a d a t i o np a t t e r n s [ J ] ． B i o t e e h n o l o g yL e t t e r s ，2 0 0 1 ．2 3 1 9 3 7 1 9 4 1 ． [ 3 ] 李文，田福军，李保庆．塑料与煤低温共焦化的热 重研究[ J ] ．中国矿业大学学报，2 0 0 0 ．2 9 5 5 1 0 5 1 4 ． L TW e n ．T I A NF u - J u n ，L IB a o - q i n g ．T h e r m o g r a v i m e t r i cs t u d y0 1 2c o - c a r b o n i z a t i o no fc o a la n dp l a s t i c s a tl o wt e m p e r a t u r e s [ J ] ．J o u r n a lo fC h i n aU n i v e r s i t y o fM i n i n g ＆T e c h n o l o g y 。2 0 0 0 ，2 9 5 5 1 0 5 1 4 ． [ 4 ]M O R IT ，S A K I M O T OM ，K A G IT ，e ta 1 ．I s o l a t i o n a n dc h a r a c t e r i z a t i o no fas t r a i no fB a c i l l u sm e g a t e r l u m t h a td e g r a d e sp o l y v i n y la l c o h 0 1 [ J ] ．B i o s c iB i o t e c h n o lB i o e h e m 。1 9 9 6 ，6 0 3 3 0 - 3 3 2 ． [ 5 ]K A w A G O S H IY ，M I T I H I R OY ，F U J I T AM ．e t a 1 ．P r o d u c t i o na n dr e c o v e r yo f8 ne n z y H l ef t o m p s e u d o m o n a sv e s i e u l a r i sv a tp o v a l o l y t i c u sP Ht h a t d e g r a d e sp o l y v i n y la l c o h o l [ J ] ．W o r l dJM i c r o b l o l B i o t e c h n o l ，1 9 9 7 ，1 3 6 3 6 7 ． [ 6 3J E A A NL ，M A L N A MK ．I s o l a t i o no fn ￡wa n dp o t e n tp o l y v i n y la l c o h 0 1 ld e g r a d i n gs t r a i n sa n dt h e i r d e g r a d a t i o na c t i v i t y [ J ] ．P o l y m e rD e g r a d a t i o na n d S t a b i l i t y ．2 0 0 3 ，8 1 3 0 33 0 8 ． [ 7 3 张兴，堵国成，陈坚．一株聚乙烯醇降解菌的降 解特性口] ．化工学报，2 0 0 6 ，5 7 7 1 6 4 9 ．1 6 5 4 ． Z H A N GX i n g ，D UG u o - c h e n g ，C H E NJ i a n ．C h a r a c t e r i s t i c so fp o l y v i n y la l c o h 0 1 d e g r a d a t i o nb a c t e r i u m x a n t h o m o n a ss p [ 刀．J o u r n a lo fC h e m i c a lI n d u s t r y a n dE n g i n e e r i n g 。2 0 0 6 ，5 7 7 t1 6 4 9 1 6 5 4 ． [ 8 ] T O M O OS ，Y O S H l H l R O1 ．M A S A R UY ．e ta 1 ． S o m ec h a r a c t e r i s t i c so fp s e u d o m o n a s0 - 3w h i c hu t i l i z e p o l y v i n y la l c o h o l [ J ] ．A g r i cB i o lC h e m ，1 9 7 3 ， 3 7 4 7 4 7 7 5 6 } [ 9 3J O S E P HHF ．S p e c t r o p h o t o m e t r i cd e t e r m i n a t i o no f p o l y v i n y lA l c o h o li np a p e rc o a t i n g s [ J ] ．A n a l y t i c a l C h e m i s t r y ．1 9 6 1 ，3 3 1 3 1 9 2 5 ． [ 1 0 ] c H o uFL ，c H O uHC ，L 1 NYS ，e ta 1 ．T h e x a n t h o m o n a se a m p e s t r i sg u mg e n er e q u i r e df o rs y n t h e s i so fx a n t h a ng u mi si n v o l v e di nn o r m a lp i g m e n t a t i o na n dv i r u l e n c ei nc a u s i n gb l a c kr o t [ J ] ．B i o c h e m i c a la n dB i o p h y s i c a lR e s e a r c hC o m m u n i c a t i o n s ， 1 9 9 7 ，2 3 3 1 2 6 5 2 6 9 ． [ 1 1 ] 赵亚华．生物化学实验技术教程[ M ] ．广州华南 理工大学出版社，2 0 0 2 ． [ 1 2 ] H A N SJK ．B a s i ck n o w l e d g ea n dp e r s p e c t i v e so f b i o e l i m i n a t i o no fx e n o h i o t i cc o m p o u n d s [ J ] ．J o u r n a l “B i o t e c h n o l o g y 。1 9 9 6 ．5 1 3 2 8 7 2 9 5 ． r 1 3 1 C O B O s v DDL ，s A N T o Y oT FC o m e t a b o l i c d e g r a d a t i o no fc h l o r o p h e n o l sb yas t r a i no f B u r k h o l d e r i ai nf e d b a t c hc u l t u r e [ J ] ．E n z y m ea n d M i c r o b i a IT e c h n o l o g y ，2 0 0 6 。4 0 1 5 7 6 0 ， [ 1 4 3O H L E NK ，c H A N GYK ，H E G E M A N NW ，e t a 1 ．E n h a n c e dd e g r a d a t i o no fc h l o r i n a t e de t h y l e n e si n g r o u n d w a t e rf r o map a i n tc o n t a m i n a t e ds i t eb yt w o - s t a g ef l u i d i z e d - b e dr e a c t o r [ J ] ．C h e m o s p h e r e ， 2 0 0 5 。5 8 3 3 7 3 3 7 7 ． 责任编辑骆振福 万方数据