8种海洋微藻中EPA和DHA含量的测定.pdf

第2 2 卷第6 期 2 0 0 6 年1 1 月 V 0 1 ．2 2 ．N o ．6 N o v ．．2 0 0 6 8 种海洋微藻中E P A 和D H A 含量的测定 D e t e r m i n a t i O nO fe i C O S a p e n t a e n O i Ca C i d a n dd O c O s a h e x a e n O j ca c j dj nm ar j n ea I g a e 张秋会1柳艳霞1赵改名1 马莺2 z _ 黝ⅣGp i H ． n 一 ⅡU 玩孽一霉霉j 熏爱鍪羹i 。嚣 鎏辇；霎墓髹蕊j ；| 5 ％氢氧化钠溶液 4 0m L ，以4m L ／m i n 的流速通过树脂柱，并浸泡2 4h ，而后 用纯化水以同样流速洗至流出水为中性，备用。 1 ．3 样品处理 称取5 ．0 0 0 0g 试样 颗粒状的试样须预先粉碎 ，置于 2 5 0m L 容量瓶中，加入少许蒸馏水湿润样品后加煮沸的蒸 馏水接近至刻度，冷却后以蒸馏水定容至刻度，摇匀。准确 移取2 5 ．0 0m L 上述样品溶液于5 0 ．0 0m L 容量瓶中，加无水 乙醇并定容至刻度，摇匀、静置，高速离心机离心l Om i n 转 速33 0 0r ／m i n ，上清液备用。 1 ．4 紫外分光光度法测定 1 ．4 ．1 测定波长的选择取标准溶液，以7 5 ％乙醇为空白， 在2 0 0 一枷n m 范围内扫描。在2 5 0 ln m 处有最大吸收。 标准对照品扫描图见图l。 上 赵 芸 螫 波长，n m 图l葛根素标准品紫外光谱图 1 ．4 ．2 标准曲线的绘制精确吸取葛根素储备液0 ．2 0 ， O ．4 0 ，0 ．6 0 ，0 ．8 0 ，1 ．0 0 ，1 ．5 0 ，2 ．0 0m L 分别置于2 5 ．0 0m L 比 色管中，用7 5 ％乙醇定容至刻度，混匀。以标准零管调节零 点，以lc m 比色杯于2 5 0n m 波长下测定吸光度，并绘制标 准曲线 标准曲线见图2 。得回归方程 C 1 5 ．0 0 3 0 5 『A b s ] 一O ．0 5 3 9 9 r 2O ．9 I 孵1 9 上 魁 巢 螫 图2 样品紫外光谱图 波长，n m 1 ．4 ．3 样品的分离纯化与测定准确吸取离心后的上清液 5 ．0 0m L 于1 0m L 小烧杯中，水浴蒸干，用热水溶解后上柱， 并用少量热水多次清洗烧杯，洗液均上柱，再用3 0m L 纯化 水以4m L ／m i n 的流速洗去杂质，然后用7 5 ％乙醇以 2m L ／m j 玎洗脱，洗脱液用1 0 0m L 容量瓶接收，直至洗脱液接 近1 0 0m L 刻度线 视含量多少定容体积，含量高定容到 2 5 0m L 。再同标准曲线测定，计算葛根素含量“ J 。 1 ．5H P L C 法 1 ．5 ．1 色谱条件。6 ‘7 ’8 3 分析柱c 。反相柱；柱温3 0 ℃；检 测波长2 5 0n m ；进样体积2 0 此；定量方式峰面积；流动 相乙腈 0 ．0 2m o L ／L 乙酸铵 8 5 1 5 ；流速 1 ．0 0 0m I ／m i n 。 1 ．5 ．2 标准曲线的绘制与样品测定精确吸取葛根素储备 液0 ．2 0 ，0 ．4 0 ，O ．6 0 ，0 ．8 0 ，1 ．0 0 ，1 ．5 0 ，2 ．0 0m L 分别置于 2 5 ．0 0m L 比色管中，用水定容至刻度，混匀，同时取1 ．3 离心 后的样品液过微孔 0 ．4 5 恤m 滤膜后用高效液相色谱仪测 定。回归方程为 形 一9 ．0 3 1 4 7 1 0 7 1 ．0 3 8 1 9 1 0 一1 0 A r 2 0 ．9 9 9 9 3 。 标准及样品液液色谱图分别见图3 、图4 。 暑 幄 鹫 ≤ 万方数据 食品安全与检测2 0 0 6 年第6 期 填充1 6 ％的D E G s ；温度柱温1 9 0 ℃，汽化室2 5 0 ℃，检测器 2 5 0 ℃；载气为高纯氮气，流速为3 0m V m i n ；进样量2 仙L ；衰 减为4 ；灵敏度为4 。 定量方法采用外标法。 1 ．5 标准溶液与样品制备 标准溶液的制备将1 0m g 的E P A 甲酯D H A 甲酯用正 己烷定容为5m L ，即为2m g ／m L 的E P A 甲酯和D H A 甲酯标 准混合溶液。 样品的制备将培养至对数生长期末期的藻液，离心后 6 0 ℃烘干称重，得生物量。然后按B l 讪一D r e r 方法⋯提取粗 脂肪，6 0 ℃烘干称重，得粗脂肪。在粗脂肪中加入5m L 的 lm o L ／L 的K O H 的c H 3 ～O H 溶液充N 2 后密封，置于7 5 ℃水 浴中酯化4 0m i n ，冷却后加入石油醚砉黾取脂肪酸甲酯。提取 液转移人5m L 锥形具塞离心管中，用N 吹干后，加入正巳 烷定容即可供色谱分析。 2 结果与讨论 采用前述方法测定了8 种海洋微藻中E P A 和D H A 的含 量。图1 和图2 分别为E P A 和D H A 标准样品谱图和样品色 谱图。E P A 甲酯保留时间为1 0 ．6 9 8m i n ，D H A 甲酯保留时间 为2 0 ．5 3 2m i n 。 色谱图 1m d v 基 趟 脚 图lE P A 和D H A 标样谱图 时问，I n i n { 蚓 脚 色谱图 1m d y 时I 司，m i “ 图2 样品色谱图 E P A 和D H A 的测定结果见表l 。 从表l 中可以看出，l 号、3 号和4 号藻株同时含有E P A 和D H A ，可以作为E P A 和D H A 混合产品的生产藻株。其中 3 号的生物量最高达到了5 0 9 ．4m g ／L ，E P A 含量也最高，为 1 6m g ／L ，占粗脂肪的1 2 ．1 ％；其中D H A 含量为1 ．5m g ／L ，占 粗脂肪的1 ．1 ％；4 号藻D H A 含量最高，D H A 含量为 3 ．2m g ／L ，占粗脂肪的9 ．1 ％；其中同时含有E P A ，产量为 1 ．3m g ／L 占粗脂肪的3 ．9 ％；l 号生物量为3 6 0 ．8m g ／L ，E P A 和D H A 含量相对较低；2 号藻株可以作为E P A 的生产藻株， 其生物量为1 8 0 ．9m g ／L ，E P A 含量为1 ．6m g ／L ，几乎不含 D H A ；7 号和8 号藻株的生物量都较高，其中仅含有微量的 E P A ，不含D H A ，可以经过优化培育，筛选出相对高产的藻株 来作为D H A 的生产藻株。 海洋微藻有望作为工业化大生产的初始藻株。而且有 些藻仅含有E P A 或者仅含有D H A ，这样有利于E P A 和D H A 的纯化和分离工作。另外，海洋微藻的培养完全可以利用自 然的阳光和海水来完成，大大降低成本。因此，海洋微藻可 以作为E P A 和D H A 的替代资源，利用海洋微藻生产E P A 和 D H A 具有广阔前景。 表l8 株藻的生物量、粗脂肪、E P A 和D H A 含量 t 表中“一”表示含量很低，无法计量 1 1 4 下转第1 2 0 页 ∞骶∞钻柏强∞筋∞。m，O 万方数据 万方数据 8种海洋微藻中EPA和DHA含量的测定8种海洋微藻中EPA和DHA含量的测定 作者张秋会， 柳艳霞， 赵改名， 马莺， ZHANG Qiu-hui， LIU Yan-xia， ZHAO Gai-ming， MA Ying 作者单位张秋会,柳艳霞,赵改名,ZHANG Qiu-hui,LIU Yan-xia,ZHAO Gai-ming河南农业大学食品科 学技术学院,河南,郑州,450002， 马莺,MA Ying哈尔滨工业大学食品科学与遗传工程研究 院,哈尔滨,黑龙江,150086 刊名 食品与机械 英文刊名FOOD 孙世春;郭健 十四株海洋微藻脂肪酸组成的研究[期刊论文]-青岛海洋大学学报 200102 2.Yongmanitchai O P Ward Growth and Eicosapentaenoic Acid Prouction by Phaeodactylum tricornutum in Batch and Continuous Culture Systems[外文期刊] 199206 3.姜悦 利用隐甲藻Crypthecodiniumcohnii生产DHA的研究[学位论文] 1998 4.王菊芳 隐甲藻Grythecodiniumcohnii培养生产DHA的优化及调控研究[学位论文] 2000 5.W Yongmanitchai;O P Ward 查看详情 198908 6.W Yongmanitchai;O P Ward Growth of and Omega-3 Fatty Acid Production by Phaeodactylum tricornutum under Different Culture Conditions 199102 7.郑建仙 功能性食品 1999 引证文献2条引证文献2条 1.梁成伟.张晓雯.苏忠亮 经济微藻重要次级代谢产物合成途径的研究进展[期刊论文]-安徽农业科学 200826 2.李春颖.仇雪梅 海洋微藻脂肪酸组成的研究进展[期刊论文]-生物技术通报 20084 本文链接