黄孢原毛平革菌的生长及降解石油条件的优化.pdf

2 0 1 2 年第 3 2 卷第 1 期 化 T 环 保 E NVI RONM E NT AL P ROTE CTI ON OF C HE M I CAL 1 NDUS TR Y 1 1 黄孢原毛平革茵的生长及降解石油条件的优化 谭丽泉 ， 余梅 ， 黄敏， 吴演乐 ， 林楚实 ， 李恒辉 广东石油化工学院 化学与生命科学学院， 广东茂名 5 2 5 0 0 0 [ 摘要 ]在限氮振荡的条件下研究了藜芦醇 、 T we e n一8 0 、 草酸、 H O 对黄孢原毛平革菌 尸 ．C． 菌 的生长量和石 油降解性能的影响。实验结果表明 藜芦醇质量浓度低于 0 0 5 g ／ L时促进 尸． C ． 菌的生长， 高质量浓度时抑制 P ．C． 菌的生长 ， 石油降解率随藜芦醇质量浓度增加先升高后下降； T w e e n一8 0质量浓度低于 7 mg m 时， P ．C ． 菌生长量和 石油降解率均随 T w e e n一8 0质量浓度增大而增加， T w e e n一8 0 质量浓度大于其临界胶束浓度时， P ．c ． 菌生长量和石 油降解率均低于未加 T w e e n一8 0时； 添加草酸抑制 P ． C ． 菌的生长， 草酸质量浓度为 3 5 mg m 时石油降解率最高 ，草 酸质量浓度为 3 5 0 mg m 时石油降解率低于未加草酸时； 加入 H O 的体系中， 石油降解率明显高于无 H ， O ， 体系。 [ 关键词 ]黄孢原毛平革菌； 生长量 ； 石油 ； 生物降解； 藜芦醇； 吐温 一8 0 ； 草酸； 过氧化氢 [ 中图分类号 ]X7 4 [ 文献标识码 ]A [ 文章编号 ]1 0 0 61 8 7 8 2 0 1 2 0 1 0 0 1 1 0 5 Co n d i t i o n Op t i mi z a t i o n f o r Gr o wt h o f P h a n e r o c h a e t e c h r y s o s p o r i u m a n d Bi 0 d e g r a d a t i 0 n o f Pe t r o l e u m T a n Li q u a n，Y u M e i ，Hu a n g M i n，Wu Y a n l e ，Li n Ch u s h i ，Li He n g h u i S c h o o l o f C h e m i s W a n d L i f e S c i e n c e ， G u m l g d o n g U n i v e r s i t y o f P e t r o c h e m i c a l T e c h n o l o g y ， M a o m i n g G u a n g d o n g 5 2 5 0 0 0 ， C h i n a Ab s t r a c t T h e e ffe c t s o f v e r a t r y l a l c o h o l ，T we e n 一 8 0，o x a l i c a c i d a n d H， O， o n t h e g r o wt h o f P h a n e r o c h P t e c h r y s o s po r i u m P． C． a n d i t s p e t r o l e u m d e g r a d a t i o n c a p a b i l i t y we r e s t u d i e d i n N． 1 i mi t e d s h a k i n g c ul t u r e ． The e x pe r i me n t a l r e s u l t s s h o w t h a t Ve r a t r yl a l c o h o l c a n p r o mo t e t he g r o wt h o f P ．C． wh e n t h e m a s s c o n c e n t r a t i o n o f v e r a t r y l a l c o h o l i s b e l o w 0． 0 5 g ／ L，b u t c a n i n hi b i t i t u n d e r h i g h c o n c e n t r a t i o n Th e p e t r o l e u m d e g r a d a t i o n r a t e i n c r e a s e s f i r s t a n d de c r e a s e s a fte r wa r d s wi t h t h e i nc r e a s e o f v e r a t r y l a l c o h o l c o n c e n t r a t i o n；W h e n t he ma s s c o nc e nt r a t i o n of T we e n一 8 0 i s l o we r t h a n 7 mg ／ L ，t h e g r o wt h o f P．C．a n d t he pe t r o l e u m d e g r a d a t i o n r a t e b o t h i n c r e a s e wi t h t h e i nc r e a s i n g o f Twe e n ． 8 0 ma s s c o n c e n t r a t i o nW he n t h e ma s s c o n c e n t r a t i o n o f T we e n 一 8 0 i s h i g h e r t h a n i t s c r i t i c a l mi c e l l e c o nc e n t r a t i o n ，t he g r o wt h o f P． C． a n d t h e p e t r o l e u m d e g r a d a t i o n r a t e b o t h a r e l o we r t h a n t h o s e o f c o n t r o l g r o u p；Ox a l i c a c i d c a n i n h i bi t t h e g r o wt h o f P． C ；T he pe t r o l e u m d e g r a da t i o n r a t e i s t h e h i g h e s t wh e n t h e ma s s c o n c e n t r a t i o n o f o x a l i c a c i d i s 3 5 mg ／ L ． b u t I S l o we r t ha n t h a t o f c o n t r o l g r o up wh e n t h e ma s s c o n c e n t r a t i o n o f o x a l i c a c i d i s 3 5 0 mg ／ L；I n t h e H ，O， ． a d d e d s y s t e m ，t h e p e t r o l e u m d e g r a da t i o n r a t e i s o b v i ou s l y h i g h e r t h a n t h a t o f c o n t r o l g r o u p ． Ke y wo r d s P h a n e r o c h a e t e c h r y s o s p o r i u m； g r o wt h； p e t r o l e u m； b i o d e g r a d a t i o n； v e r a t r y l a l c o h o 1 T we e n ． 8 0； o x a l i c a c i d； h y d r o g e n pe r o xi d e 白腐真菌可利用其 自 身产生的胞外酶 木 质素过氧化物酶 L i P 、 锰过氧化物酶 Mn P 和漆酶 对有机污染物进行降解， 菌体生长与产酶情况影响白 腐真菌对污染物的降解率， 而白腐真菌的生长和产酶 能力是由其培养条件决定的n 。如何对白腐真菌进 行高效培养并将其应用于对环境污染物的生物降解 己成为环境科学研究的热点 b 。研究发现 ，在 kq腐 真菌的培养过程中添加某些营养物质可以提高酶的 活陛 ， 从而改善白腐真菌对污染物的降解效果。 [ 收稿 日 期 ]2 0 1 1 0 8 2 2 ； [ 修订日期 ]2 0 1 1 0 9 2 2 。 [ 作者简介 ]谭丽泉 1 9 7 8 一 ， 女， 广东省茂名市人 ，硕士 ． 讲师 ， 主要从事应用化学及土壤污染修复研究工作。电话 0 6 6 8 2 9 8 1 1 0 9 ， 电由 t o u c h i n g 5 2 2 1 6 3 ． c o m。 [ 项目基金 ] 广东省科技计划项目 2 0 1 0 B 0 3 1 8 0 0 0 1 0 。 化 工 环 保 E N VI R O N ME NT A L P R O T E C T I O N OF C H E MI C AL 1 ND US T R Y 2 0 1 2 - 第 3 2 卷 本工作在 白腐真菌的典 型菌种 黄孢原毛 平革菌 P h a n e r o c h a e t e c h r y s o s p o r i u m， 简称 P ． C ． 菌 的生长过程中分别加入藜芦醇 、 T we e n一8 0 、 草 酸 、 H O 4种试剂 ， 考察了它们对 P． C ． 菌生长情况 及其对 P． c ． 菌降解石油能力的影响。 1 实验部分 1 ． 1 菌种及培养基 P ． c ． 菌购 自广州市微生物研究所， 培养温度 3 0℃， 每月继代 1 次 ， P ． c ． 菌生长 4 ～ 5 d后接种于 马铃 薯固体培养基 中， 6 ～ 8 d后形 成 白色粉状 分生孢子 。将孢子无菌转人马铃薯液体培养基 中， 振荡 ， 制成乳白色的菌悬液 ， 4℃ 保存备用。 液体限氮培养基 的组成 K H ， P O 0 ． 2 g ／ L ， Mg S O4 7 H2 O 0 ． 0 5 g ／ L， C a C 1 2 0 ． 0 1 g ／ L， 葡萄糖 1 0 g ／ L， 维生素 B1 1 mg ／ L，酒石酸铵 1 ． 2 mg ／ L ， M nSO4。H2 O 0． 5 m g ／ L， Fe SO4。7 H2 O 0． 1 m g ／ L， A1 K S O4 2 0 ． 0 1 mg ／ L， Na Mo O4 0 ． 0 1 mg ／ L， Cu S O4‘ 5 H2 O 0 ． 0 1 mg ／ L， Co S O4 0 ． 1 mg ／ L。 1 ． 2 试剂和仪器 实验所用石油取 自茂名石化公司炼油厂 ， 为黑 色黏稠液体， 1 6 0 o C下恒温蒸馏 4 h 后置于棕色试 剂瓶中备用。石油醚 、 藜芦醇 、 T we e n一8 0 、 草酸和 H ， 0 ， 质量分数 3 0 ％ 均为分析纯。 Y XQL S一3 0 S 1 1型立式压力蒸汽灭菌器、 T H Z一9 2 B型气浴恒温振荡器 上海博迅实业有限 公司医疗设备厂； L R Hl 5 0 B型培养箱 广东省 医疗器械厂。 1 ． 3 实验方法 1 ． 3 ． 1 不 同试剂对 尸 ． C ． 菌生长情况的影响 在不同的锥形瓶 中加入液体限氮培养基 ， 灭菌 后加入一定量的菌悬液 加入前先用细胞干重法 测 定菌悬液的 P ． c ． 菌干重 ， 然后分别加入不同质量 浓度的藜芦醇 、 T we e n一8 0 、 草酸 、 H ， O， ， 用特制棉 塞塞住瓶 口， 并用牛皮纸包住锥形 瓶 ， 于 3 0℃、 1 6 0 r ／ m in的条件下恒温振荡 9 d 后再测定培养液中 P ．C ． 菌的生长量 培养液与菌悬液中P ．C ． 菌干重的 差值 ， g 。对照实验条件相同， 将添加的试剂换成 蒸馏水。每组实验做 3 个平行试样取平均值。 1 ．3 ． 2 不同试剂对 P ．C ． 菌石油降解率的影响 在不同的锥形瓶中加入一定质量的石油、 液 体限氮培养基 ， 灭菌后加入一定量的菌悬液， 分 别加入不同质量浓度的藜芦醇 、 T w e e n一8 0 、 草 酸 、 H O ， 用特制棉塞塞住瓶 口， 用牛皮纸包住锥 形瓶 ， 于 3 0℃、 1 6 0 r ／ mi n的条件下恒温振荡 2 5 d 后 ， 采用重量法 测定培养液中石油的质量 ， 计算 石油降解率。对照实验条件相 同， 将添加 的试剂换 成蒸馏水。每组实验做 3 个平行试样取平均值。 2 结果与讨论 2 ． 1 藜芦醇对 P ． 菌生长量及 P ． e 菌石油降解率 的影响 藜芦醇质 量浓度对 P． C． 菌生长量 的影 响见 图 1 。由图 1可见 藜芦醇质量浓度低于 0 ． 0 5 g ／ L 时 ， 藜芦醇对 P ． c ． 菌的生长有促进作用 ； 藜芦醇质 量浓度高于 0 ． 0 5 g ／ L时 ， 藜芦醇会抑制 P ． C ． 菌的生 长 ； 藜芦醇质量浓度越高， P ． C ． 菌生长量越少。 黎芦 醇质量 NN ／ g‘ L 1 图1 藜芦醇质量浓度对 P ． C ． 菌生长量的影响 藜芦 醇质 量浓度对 P． C ． 菌石油 降解率 的影 响见 图 2 。由图 2可见 藜芦醇质量浓度低于 0 ． 2 5 g ／ L时， 随藜芦醇质量浓度升高 ， 石油降解率逐渐 增加 ； 藜芦醇质量浓度为 0 ． 2 5 g ／ L时 ， 石油 降解 率最高 ， 达 7 4 ． 7 4 ％， 是未加藜芦醇时 3 8 ． 5 3 ％ 的 2倍左右 ； 随藜芦醇质量浓度继续增加 ， 石油降解 率逐渐下降。在本实验的藜芦醇质量浓度范围内 0 ．0 5 ～ 1 ． 0 0 g ／ L ， 添加藜芦醇后石油降解率均高于 未添加藜芦醇。 藜芦醇质量浓度他 L1 图2 藜芦醇质量浓度对 P ． C ． 菌石油降解率的影响 第 1 期 谭丽泉等． 黄孢原毛平革菌的生长及降解石油条件的优化 综合 图 1 和图 2的结果可以发现 ， 藜芦醇对 P ． c ． 菌的生长有较为明显的抑制作用， 但低质量浓度 的藜芦醇可显著提高 P ． c ． 菌的石油降解率。因为 P． c ． 菌对石油 的降解属于间接氧化 ， 需要一些易被 L i P直接氧化成 自由基 的化学物质的帮助 ， P． C ． 菌 的次级代谢产物藜芦醇就充 当了该氧化还原反应 的电子调节者 ， 诱导 了酶的合成。由于藜芦醇具有 与石油相似的结构， 因而也成为 L i P的降解底物， 又可避免 L i P因培养过程中产生的过量 H 0 而失 活 ， 而且还可以和 尸 ． c ． 菌所分泌的草酸反应 ， 充 当 草酸的电子调节者 J 。因此， 在 P ． c ． 菌的降解反 应体系中加入适量的藜芦醇可以提高 尸 ． c ． 菌的石 油降解能力 。 2 ． 2 Tw e e n一8 0对 菌生长量及 P ． C 菌石油 降解率的影响 T we e n一8 0属于非离子型表面活性剂 ， 临界胶 束浓度 C MC 为 1 4 mg ／ L， 具有很好 的增溶和乳 化作用 ， 是较为理想的降解促进剂 l o 。T we e n一8 0 质量浓度对 P ． C． 菌生长量 的影响见图 3 。由图 3 可见 当T we e n一8 0 质量 浓度小 于 7 mg ／ L时 ， 随 T w e e n一8 0质量浓度增大， 尸 ． c ． 菌生长量增加 ； 当T we e n一8 0质量浓度为 7 mg ／ L时， P． C ． 菌菌球 生长量最大 ， 为 0 ． 0 8 9 3 g ， 是未加 T we e n一8 0时 0 ． 0 4 1 3 g 的 2倍左右。这是 因为 ， T we e n一8 0 分子 中含 有的聚乙氧基 亲水基 团具有较高 的负 电 荷密度 ， 有利于孢子 、 菌丝 的凝结 u 。当 T we e n一 8 0质量浓度大于其 C MC时， 尸 ． c ． 菌菌球干重小 于未加 T we e n一8 0时 ， P． c ． 菌 的生长受到抑制。 这 是 因为 微生 物 的细 胞膜 是 由大量 磷脂 分 子组 成 的 ， 而磷 脂 与 表 面活 性 剂 有类 似 的结 构 和性 能 ， 所 以细胞 膜 对 表 面活 性 剂具 有 较 强 的 吸 附 作用 ， 在表面活性剂浓度较高时会产生生物毒 性 ， 对 P． c ． 菌 的生长起到抑制作用 。 T we e n 一 8 0 质量浓度／ rag- L J 图3 T w e e n一8 0质量浓度对P． C． 菌生长量的影响 T we e n一8 0质量浓度对 P ． c ． 菌石油降解率的 影响见图 4 。由图 4可见 当 T we e n一8 0质量浓 度小于 7 mg ／ L时， 随 T w e e n一8 0质量浓度增大， 石油降解率增加 ； 当 T we e n一8 0质量浓度大于 7 mg ／ L时 ， 石油降解率显著降低 ， 低于未添加 T we e n 一 8 0的石油降解率。这是因为， T w e e n 一8 0质量浓 度较低时 ， 可提高微生物细胞膜的渗透性 ， 使细 胞内的酶较易透过细胞膜分泌出来， 有利于酶的合 成， 且膜渗透性的提高有助于化学底物进出细胞， 可提高酶对石油烃类有 机物的生物氧化能力 。另 外， T w e e n 一8 0 还可使石油在体系中的溶解和吸收 性能增强 ， 促进微生物对石油的降解。T w e e n 一 8 0 质量浓度较高时对 P ． c ． 菌 的生长和石油的降解起 抑制作用 ， 原因可能是 i 由于 T we e n一8 0质量 浓度高于临界胶束浓度后会在溶液中形成大量的 胶束 ， 虽然石油溶解度增大 ， 但被包裹在胶束 中， P ． c ． 菌产生的胞外酶需要先破坏胶束才能降解石 油 ； 2 T we e n一8 0与微生物相互作用干扰了微生 物对石油的降解， 当 T w e e n一8 0 质量浓度较高时， 也可作为碳源而被优先利用。 T w e e n 一 8 0 质量浓度／ mg L。 。 图4 T we e n一8 0 质量浓度对 P ． C ． 菌石油降解率的影响 2 ． 3 草酸对 P ． C 菌生长量及 P． C ． 菌石油降解率的 影响 草酸质量浓度对 P ． C ． 菌生长量的影响见图 5 。 草酸质量浓度／ n l g L 图5 草酸质量浓度对 P ． C ． 菌生长量的影响 化 工 环 保 E NV I R O NME NT AL P R O T E C T I O N O F C HE MI C A L I ND US T R Y 2 0 l 2 年第 3 2 卷 由图 5可见 ， 随草酸质量浓度增加 ， P ． C ． 菌生 长量快速下降， 说明添加草酸会抑制 P ． C ． 菌的生 长 ， 但还不致于杀死 P． C ． 菌 。这是因为草酸质量 浓度过高时会对 尸． c． 菌的代谢产物产生影响，对 P ． c． 菌生长不利的物质不 断积累 ， 使 P． c． 菌繁衍 和生长速率减缓。 草 酸是 J p ． C． 菌降解过程 中分泌 的一种有机 酸 ， 添加适量的草酸能有效提高 Mn P的活性 ， 在无 H O 的条件下支持 Mn P催化反应 ， 提高L i P的活 性 同时催化 Mn P氧化降解芳香化合物 ， 因此提高 P ． c ． 菌的石油降解率。草酸质量浓度对 P ． c ． 菌石 油降解率的影响见图 6 。由图 6可见 草酸质量浓 度为 3 5 m g ／ L时， 石油降解率最大， 高达 6 5 - 3 0 ％； 草酸 质量 浓 度为 3 5 0 mg ／ L 时 ， 石油 降解 率 为 3 6 ． 6 0 ％， 低于未加草酸时 4 2 ． 1 0 ％ ， 说明草酸质量 浓度过高会抑制 P ． c ． 菌对石油的降解。 草酸质量浓度／ mg L 。 。 图6 草酸质量浓度对 P ． c ． 菌石油降解率的影响 2 ． 4 H O 对 P - C 菌石油降解率的影响 当向石油 降解 体系中加入 H， O，时 ， P． c． 菌 会在氧化碳氢化合物的过程中消耗体系 中的溶解 氧 ， 使液相中的溶解氧浓度不断下降； 同时 H O 不 断发生分解反应 ， 补充体系 中消耗掉的溶解氧。本 实验根据文献 [ 1 4 ] 的结果， 保持体系中 H ， O ， 的质 量浓度为 2 0 0 mg ／ L 。加入 H， O ， 对石油降解率的影 响见图 7 。由图 7可见 无 H O 的体系中， 降解反 应前期石油降解率上升较明显， 2 0 d 后降解率增加 趋缓； 加入 H ． O ， 的体系中， 石油降解率明显高于 无H ， O ， 体系， 且石油降解率不断升高。这是因为 L i P 和 Mn P必须在 H， O， 的作用下产生 O H 自由 基， 实现酶的催化作用而后才对污染物发生降解反 应。另外， P ． C ． 菌属于好氧菌， 需要以O 作为最终 电子受体， 在尸 ．c ． 菌降解石油的过程中， O 不断被 P ． c ． 菌消耗而使体系成为无氧状态， 添加 H O 后 能分解产生 O ， 为P ． C ． 菌提供充足的电子受体， 使 石油降解率上升。此外， 由于 H O 有较高的氧化 还原电位 ， 是较强的氧化剂 ， 还可以直接氧化体系 中的烃类污染物 ， 稳定体系的 p H， 大幅度提高微生 物的活性和它们对烃类污染物的降解能力 。 降解时间， d 图7 加入 H O 对石油降解率的影响 无 H ， O ， ； - 加人 H， O， 3 结论 a 分别添加藜芦醇、 T w e e n 一 8 0 、 草酸、 H ， O ， 4 种试剂对 P ． c ． 菌生长量和 P． c ． 菌石油降解性能的 研究发现 藜芦醇质量浓度低于 0 ． 0 5 g ／ L时 ， 藜芦 醇对 P． C ． 菌的生长有促进作用 ； 藜芦醇质量浓度 高于 0 ． 0 5 g ／ L时 ， 藜芦醇会抑制 P ． C ． 菌的生长。藜 芦醇质量浓度低于 0 ．2 5 g ／ L时， 石油降解率随藜芦 醇质量浓度升高而增加； 藜芦醇质量浓度为 0 ．2 5 g m 时， 石油降解率最高， 达 7 4 ． 7 4 ％； 随藜芦醇质量浓 度继续增加， 石油降解率逐渐下降。 b 当 T we e n一8 0质量浓度小于 7 mg ／ L时， P． c ． 菌生长量和石油降解率均随 T we e n一8 0质量 浓度增大而增加 ； 当 T we e n一8 0质量浓度大于其 C MC时，P ． c ． 菌生长量和石油降解率均低于未加 T we e n 一8 0时， P ． C ． 菌的生长受到抑制。 C 添加草酸会抑制 P ． C ． 菌的生长 ， 草酸质量 浓度为 3 5 mg ／ L时 ， 石油降解率最高 ， 达 6 5 - 3 0 ％； 草酸质量浓度过高抑制 P． C ． 菌对石油 的降解 ， 草 酸质量浓度为 3 5 0 mg ／ L时石油降解率为 3 6 ．6 0 ％， 低于未加草酸时。 d 加入 H ， 0 ， 的体系中， 石油降解率明显高于 无 H， O ， 体系。 参考文献 [ 1 ] 唐媛 ， 谢冰， 吕宝一．白腐真菌处理难降解有机物的 培养条件及应用研究 [ J ] ．世界科技研究与发展， 第 1 期 谭丽泉等． 黄孢原毛平革菌的生长及降解石油条件的优化 2 0 0 8 ， 3 0 1 6 06 5 ． [ 2 ] 卢海涛， 冯权 ， 杨清香， 等．固定化白腐真菌反应器与 接触氧化反应器联用处理癸二酸生产废水 [ J ] ．化工 环 保 ， 2 0 1 0 ， 3 0 6 5 1 25 l 5 ． [ 3 ] 林刚， 文湘华， 钱易．应用白腐真菌技术处理难降解 有机物的研究进展 [ J ] ．环境污染治理技术与设备， 2 0 0 1 ， 2 4 17 ． [ 4 ] 吴林林 ， 阮宇鹰 武琳慧 ， 等．白腐真菌在环境保护中研 究与应用进展 [ J ] ．上海化工， 2 0 0 6 ， 3 1 1 8 1 0 ． [ 5 ] 高航， 刘勇弟， 赵庆祥．诱导剂对白腐真菌降解难降 解有机物的作用 [ J ] ．上海环境科学， 2 0 0 3 ， 2 2 4 2 7928 2． [ 6 ] 李慧蓉 ， 李华兵， 赵飞．黄孢原毛平革菌对直接深蓝 L一3 R B的脱色降解 [ J ] ．染料工业，2 0 0 0 ，3 7 1 364O． [ 7 ] 李慧蓉 ，陈建海．黄孢原毛平革菌对葸的降解研究 [ J ] ．化工环保 ， 2 0 0 0 ， 2 0 2 1 1 1 4 ． [ 8 ] 黄秀梨．微生物学实验指导 [ M] ．北京 高等教育出 版社， 1 9 9 9 61 7 ． [ 9] 张丽芳 ， 肖红 ， 魏德洲．表面活性剂对土壤石油污 染 物微生物降解的影响 [ J ] ．辽 宁化工， 2 0 0 2， 3 1 1 2 5 0 95 1 3 ． [ 1 0 ] 李慧蓉 ， 张国荣 ， 刘美娟．黄孢原毛平革菌反应体系 中藜芦醇的动态变化 [ J ] ．中国环境科学， 2 0 0 2 ， 2 2 5 4 0 44 0 7 ． 宋玉芳 ， 孙铁珩， 许华夏 ， 等．表面活性剂T w一 8 o x 土壤中多环芳烃生物降解的影响 [ J ] ．应用生态学 报 ， 1 9 9 9 ， 1 0 2 2 3 02 3 2 ． 贾凌云， 吴刚， 杨凤林．表面活I生剂在污染土壤生物修 复中的应用 [ J ] ．现代化工， 2 0 0 3 ， 2 3 9 5 8 6 1 ． As t h e r M ， Co r r i e u G ， Dr a p r o n R ， e t a 1 ． Ef f e c t o f T we e n 8 0 a n d o l e i c a c i d o n l i g n i n a s e p r o d u c t i o n b y P h a n e r o c h a e t e c h r y s o sp o r i u m 1 NA - 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